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薄层色谱硅胶板

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柱层层析硅胶粉分享使用方法

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柱层层析硅胶粉分享使用方法

发布日期:2020-09-03 作者: 点击:

柱层层析硅胶粉


1.称量:200-300目硅胶,称30-70倍于上样量,如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以。


2.搅成匀浆:加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌,如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯丙酮体系,就用石油醚拌,如果洗脱剂是氯仿醇体系,就用氯仿拌,如果不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥,以除去1%的醇。如果样品对酸敏感,不能用氯仿体系过柱。


3.装柱:将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3 体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内,随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯仿)将其冲入柱中。


4.压实:沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定,柱床约被压缩至9/10体积,无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。


5.上样:干法湿法,海沙是没必要的。上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面,然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。压实:沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定,柱床约被压缩至9/10体积,无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。


6.过柱和收集:柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡,太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱。收集的例子:10mg.上样量,1g硅胶H,0.5ml收—馏分,1-2g上样量,50g硅胶(200-300目),20-50ml收—馏分。


7.检测:更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度-般比喷显剂底1-2个数量级。


8.送谱:收集的产品旋干,在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体,可过一-小凝胶柱,作为送谱前的Z后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶"峰。


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